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模式生物由于其結構簡單、生活周期短、培養(yǎng)簡單、基因組小等特點,在生物醫(yī)學等領域發(fā)揮重要作用。模式生物作為材料不僅能回答生命科學研究中*基本的生物學問題,對人類一些疾病的病理解析和**也有重大的借鑒意義。
在許多模式生物研究中,研究人員需要對各種小型模式生物,如秀麗線蟲、斑馬魚幼魚、果蠅、擬南芥等進行觀察和分選。對于傳統(tǒng)流式細胞儀來說,小型模式生物粒徑過大且很脆弱,很容易在實驗過程中破碎或死亡,而鏡下手動分選繁瑣且枯燥,分選充滿主觀因素,因而限制了實驗的規(guī)模和準確率。為了填補這一空白,在1998年,COPAS 系統(tǒng)(大粒徑復雜顆粒物參數(shù)分析和分選儀)應運而生。
型號:COPAS Infinity
COPAS系統(tǒng)是 Union Biometrica 公司基于傳統(tǒng)流式細胞儀原理設計發(fā)明的一款**于大粒徑顆粒物全自動高通量分析分選平臺,首先應用于秀麗線蟲高通量藥物篩選,COPAS 系統(tǒng)又被人稱作“線蟲篩選器”。其通過自動化代替了耗時的手工分選過程,**減少了實驗所需的時間,消除人為誤差,實現(xiàn)了以前無法想象的高通量藥物篩選。
COPAS Infinity 與*初的 COPAS 流式細胞平臺一樣,提供了對活的多細胞生物、細胞簇、單細胞、種子和無機顆粒等對于傳統(tǒng)流式細胞儀來說太大或太脆弱樣品的自動化高通量分析和分選。此外,COPAS Infinity 在更小的尺寸范圍內**提高了檢測靈敏度,并增加了參數(shù)檢測數(shù)量,搭配 Profiler 高級軟件可對樣品進行細致分析。
研究多細胞結構的實驗人員都知道,細胞形成群體結構之后,其信息交互和行為會與單細胞時明顯不同。COPAS Infinity 大粒徑模式生物流式分選平臺系統(tǒng)儀允許實驗人員對組織、**或**中的細胞與細胞之間的相互作用進行研究,而不需要用傳統(tǒng)的方法破壞其整體結構。而針對模型生物,COPAS Infinity 可以代替手工分揀,提供快速、靈敏、溫和、重復性高的全自動化、高通量分析和分選功能。
**性技術原理
基于傳統(tǒng)流式細胞儀原理,樣品在壓力的作用下從連續(xù)攪拌的樣品杯進入流動室(FlowCell),在鞘液的包裹下形成一條狹窄的液流進入流動室中心,通過激光束的檢測。系統(tǒng)根據(jù)激光束檢測結果控制樣品的去留,默認狀態(tài)下,樣品被溫和的氣流引導至“回收容器”中,當系統(tǒng)接收到分選信號時,空氣分選器短暫關閉,含待分選樣品的液滴,即可直接流入對應容器中完成分選。
與傳統(tǒng)流式細胞儀相比,大粒徑流式分選平臺在幾個重要的設計上有所不同:
(1)大粒徑流動室可以容納 2-1500μm 樣本,比傳統(tǒng)流式細胞儀要大得多,使其能夠完成大粒徑生物樣本的高通量分選,包括但不限于秀麗線蟲、果蠅、蠶卵、斑馬魚、擬南芥、干細胞、胰島、花粉等;
(2)較慢的液流流速和較低的運行壓力,樣品分選過程中液流剪切力小,避免了高剪切力對生物樣本的損害,保證模式生物和多細胞樣本的生物活性;
(3)**氣壓分選技術,利用溫和氣流將生物樣本以液滴的形式進行分選,相比較傳統(tǒng)流式技術采用機械力或靜電電荷力進行分選,避免了生物樣品的破碎即失活。
控制和分析軟件
FlowPilot 軟件專為大粒徑流式分選平臺設計,平臺集成功能強大的硬件和用戶友好的軟件控制,能夠直觀地呈現(xiàn)各樣品參數(shù),并通過多種不同的分選模式對各樣品逐一分選,獲得目標樣品及量化的樣品參數(shù)數(shù)據(jù),方便、快捷且結果有據(jù)可循,特別適合于各種高通量微模式生物研究及大規(guī)模藥物篩選等領域。
可使用 FlowPilot 控制軟件進行如下操作:
(1)根據(jù)個人喜好輕松地進行儀器控制、數(shù)據(jù)采集和分配選項面板的訪問或隱藏;
(2)自定義和操作多個**的統(tǒng)計圖像(各參數(shù)直方圖、X-Y關系圖等),包括每個區(qū)域的自定義縮放和邏輯門控選項;(3)檢索實驗文件、樣本模板和數(shù)據(jù)分析文件(在線或離線),為采集后再分析提供了強大的工具支持;
(4)創(chuàng)建自定義的分選輸出模板,用于對于多孔板中每個孔的分配信息進行設定;
(5)以標準的流式細胞儀格式存儲數(shù)據(jù),以便以后使用實驗室中其他傳統(tǒng)的流式細胞儀軟件進行分析等。
Profiler/FlowPilot ProTM 軟件
Profiler/FlowPilot Pro 高級功能是在 FlowPilot 軟件基礎上,進一步對樣品個體光密度(EXT)和熒光參數(shù)(Red、Green、Yellow)的徑向分布進行掃描,獲得 Profiler 圖像,根據(jù) Profiler 圖形可對生物樣品進行進一步處理和分析。
Profiler 可以沿樣本軸向長度(TOF)進行多達8000個光學數(shù)據(jù)采樣,將數(shù)據(jù)采集從整體水平提升到**和多細胞的水平。隨后,軟件以圖形和數(shù)字的形式呈現(xiàn)這些信號沿物體長度方向上的變化,向實驗人員顯示每個樣品在多個“光學剖面”上所有光學參數(shù)的地形圖及強度變化,以峰高、峰寬、峰數(shù)和相對位置的形式進行表現(xiàn)——所有參數(shù)都可作為后續(xù)的分選條件。
Partial Profiling
Profiler 的另一個分析特性是“Partial Profiling”部分剖析,在樣本上選定一個區(qū)域,“Partial Profiling”會顯示出該區(qū)域詳細光學或熒光特性(峰高、峰寬及數(shù)量等),以生成用戶自定義分選參數(shù),“Partial Profiling”可以用于分析樣品部分區(qū)域的特有光學特性。
COPAS Infiniy 標配**性 FlowPilot-Pro 軟件平臺,集成功能強大的硬件和直觀的用戶控制,提高了光學靈敏度、流體力學參數(shù)調節(jié)和定量分選性能,為科研人員的實驗室提供了更高級別的分析分選功能和用戶體驗,特別是在高通量篩選上系統(tǒng)性能更加**、靈活性和易用性更加強大。
特點及優(yōu)勢
適用范圍廣
直徑 2-1500μm 樣品,從無機細顆粒物到斑馬魚均適用;
多種 COPAS Infinity 產(chǎn)品型號可供選擇,每種規(guī)格產(chǎn)品適用于某一特定粒徑范圍樣品使用;
多PMT和激光器可選,可用于各種熒光標記物研究;
分選模式多樣化,清晰辨別樣本差異;
數(shù)據(jù)客觀
量化生物顆粒徑向長度(TOF)、光密度(EXT)和熒光參數(shù),快速分析顆粒性質;
自定義參量范圍,系統(tǒng)根據(jù)設定值自動篩選;
具有熒光補償功能,測量參數(shù)更準確;
系統(tǒng)自動檢測、計算、比對生物微粒各項參數(shù),完成篩選過程,排除人為因素干擾;
標配 Profiler 軟件可對單微粒光密度、熒光參數(shù)的徑向分布做進一步細致分析。
全自動,準確高效
**分選速率可達20萬個/小時,節(jié)約大量人工成本;
系統(tǒng)按照程序,自動將生物微粒分配到96孔板或其他孔板中;
系統(tǒng)對每一個生物微粒逐個分析、分選,重現(xiàn)性更好;
適合大規(guī)模篩選,是目前世界上應用*成功的微模式生物分選系統(tǒng)。
生物活性保持
分選過程始終保持無菌環(huán)境,防止樣本污染;
氣流分選及低運行壓力保證生物樣本的生物活性和完整性;
高國際認可度
截止2019年,大粒徑流式分選平臺在全球已有超過2000個用戶,發(fā)表文獻數(shù)千篇,產(chǎn)品分布于多個國家**大學和研究所實驗室,應用涵蓋多個方面,國際認可度高。
獨特硬件設計
固定流動室設計,**性強。COPAS Infinity 為**性設計,每臺機器只能用于某個固定粒徑范圍樣品分析分選使用;
根據(jù)系統(tǒng)所配置的流動室光學**模塊(Fluidics and Optics Core Assemblies,F(xiàn)OCA)的不同,COPAS Infinity 系統(tǒng)有四種不同的型號。下表為不同規(guī)格 COPAS Infinity 系統(tǒng)所適用的樣品粒徑范圍以及常用的研究對象。
模塊化光學系統(tǒng)
COPAS Infinity 光學系統(tǒng)包括激光器、FOCA、軸向光檢測器、FS軸向散射光檢測器、PMT熒光散射傳感器以及濾光片等組成。COPAS Infinity 系統(tǒng)*多可以配置3個激光器,軸向光檢測器用于樣品軸向長度(TOF,飛行時間)的測量,樣本阻擋光線的總積分信號決定了樣品光密度(EXT,透光度)的大小。FS檢測器測量樣本軸向小角度散射光量,熒光散射可在四種不同的PMT探測器上同時測量,PMT探測器和濾光片元件也可根據(jù)用戶需求進行相應配置。
X-Y活動性分選平臺
X-Y分選平臺允許用戶將分析結束的樣品進行分選純化并允許分配到24/48/96/384孔板、離心管或其他容器中,COPAS Infinity 系統(tǒng)允許用戶創(chuàng)建自定義輸出模板,用戶可在軟件上編輯分選程序,包括每個分配位置包含的信息,如每個孔位輸出的樣本類型及個數(shù)等。
集成化功能(Integration)
COPAS Infinity也可作為多步工作站(Workflow)一個組成部分,允許響應來自外部控制器和軟件的指令信號觸發(fā)其進行工作。
COPAS Infinity的設計占地面積小,能夠更容易地安裝在商用生物安全柜內,從而提高安全性和無菌性。
多樣化進樣方式
樣品通常從50mL樣品管種自動加樣,攪拌器輔助防止樣品聚集,從而保證上樣均勻,較大粒徑的樣品可選配750mL和1500mL大型進樣杯和攪拌器。另外,針對異常脆弱或易于下沉/上浮的樣品(如脂肪細胞、植物原生質體等),可選擇5mL小型旋轉樣品杯OSIS (Oscillating Sample Introduction System) 來進行加樣。
LP SamplerTM
LP Sampler(Large Particle Sampler)是專門為溫和處理直徑10-1500μm的大顆粒、易碎樣品而設計的自動加樣系統(tǒng),它能夠從多孔板或培養(yǎng)皿中輕輕抽吸這些樣品,并將其完整、可行地輸送至COPAS Infinity系統(tǒng)。
配置選擇方案
(1) FOCA類型選擇
根據(jù)實驗需求選擇合適規(guī)格型號FOCA
(2) 多激光配置
*多三色激光器可選用于激發(fā)樣品熒光,標配488nm藍色激光器,可選375-660nm激光器
(3) 進樣方式選擇
根據(jù)COPAS Infinity規(guī)格不同可選擇50,750或1500mL規(guī)格樣品杯進樣,針對特殊樣品(如脂肪細胞等),可選擇5mL旋轉樣品杯進行加樣。也可選配Large Particle (LP) Sampler? 系統(tǒng)可以將10-1500 μm范圍內的樣品從多孔板、培養(yǎng)皿或者其他容器中進行全自動上樣
(4) 集成化功能(Integration)
完整的高通量分選平臺
COPAS Infinity 大粒徑顆粒物高通量分選平臺能可配合LP Sampler組成一套更加完整的高通量分選平臺;
能夠實現(xiàn)從多孔板進樣到多孔板分選的全自動化操作;
型號:COPAS Infinity & LP Sampler
應用領域
大粒徑流式分選平臺可用于直徑在2-1500μm的生物或非生物樣本分析分選,以下是來自全球2000位用戶發(fā)表文章統(tǒng)計的常見應用,相關文獻您可以移步到官方網(wǎng)站來參閱:https://www.unionbio.com/publications
模式生物由于其結構簡單、生活周期短、培養(yǎng)簡單、基因組小等特點,在生物醫(yī)學等領域發(fā)揮重要作用。模式生物作為材料不僅能回答生命科學研究中*基本的生物學問題,對人類一些疾病的病理解析和**也有重大的借鑒意義。
在許多模式生物研究中,研究人員需要對各種小型模式生物,如秀麗線蟲、斑馬魚幼魚、果蠅、擬南芥等進行觀察和分選。對于傳統(tǒng)流式細胞儀來說,小型模式生物粒徑過大且很脆弱,很容易在實驗過程中破碎或死亡,而鏡下手動分選繁瑣且枯燥,分選充滿主觀因素,因而限制了實驗的規(guī)模和準確率。為了填補這一空白,在1998年,COPAS 系統(tǒng)(大粒徑復雜顆粒物參數(shù)分析和分選儀)應運而生。
型號:COPAS Infinity
COPAS系統(tǒng)是 Union Biometrica 公司基于傳統(tǒng)流式細胞儀原理設計發(fā)明的一款**于大粒徑顆粒物全自動高通量分析分選平臺,首先應用于秀麗線蟲高通量藥物篩選,COPAS 系統(tǒng)又被人稱作“線蟲篩選器”。其通過自動化代替了耗時的手工分選過程,**減少了實驗所需的時間,消除人為誤差,實現(xiàn)了以前無法想象的高通量藥物篩選。
COPAS Infinity 與*初的 COPAS 流式細胞平臺一樣,提供了對活的多細胞生物、細胞簇、單細胞、種子和無機顆粒等對于傳統(tǒng)流式細胞儀來說太大或太脆弱樣品的自動化高通量分析和分選。此外,COPAS Infinity 在更小的尺寸范圍內**提高了檢測靈敏度,并增加了參數(shù)檢測數(shù)量,搭配 Profiler 高級軟件可對樣品進行細致分析。
研究多細胞結構的實驗人員都知道,細胞形成群體結構之后,其信息交互和行為會與單細胞時明顯不同。COPAS Infinity 大粒徑模式生物流式分選平臺系統(tǒng)儀允許實驗人員對組織、**或**中的細胞與細胞之間的相互作用進行研究,而不需要用傳統(tǒng)的方法破壞其整體結構。而針對模型生物,COPAS Infinity 可以代替手工分揀,提供快速、靈敏、溫和、重復性高的全自動化、高通量分析和分選功能。
**性技術原理
基于傳統(tǒng)流式細胞儀原理,樣品在壓力的作用下從連續(xù)攪拌的樣品杯進入流動室(FlowCell),在鞘液的包裹下形成一條狹窄的液流進入流動室中心,通過激光束的檢測。系統(tǒng)根據(jù)激光束檢測結果控制樣品的去留,默認狀態(tài)下,樣品被溫和的氣流引導至“回收容器”中,當系統(tǒng)接收到分選信號時,空氣分選器短暫關閉,含待分選樣品的液滴,即可直接流入對應容器中完成分選。
與傳統(tǒng)流式細胞儀相比,大粒徑流式分選平臺在幾個重要的設計上有所不同:
(1)大粒徑流動室可以容納 2-1500μm 樣本,比傳統(tǒng)流式細胞儀要大得多,使其能夠完成大粒徑生物樣本的高通量分選,包括但不限于秀麗線蟲、果蠅、蠶卵、斑馬魚、擬南芥、干細胞、胰島、花粉等;
(2)較慢的液流流速和較低的運行壓力,樣品分選過程中液流剪切力小,避免了高剪切力對生物樣本的損害,保證模式生物和多細胞樣本的生物活性;
(3)**氣壓分選技術,利用溫和氣流將生物樣本以液滴的形式進行分選,相比較傳統(tǒng)流式技術采用機械力或靜電電荷力進行分選,避免了生物樣品的破碎即失活。
控制和分析軟件
FlowPilot 軟件專為大粒徑流式分選平臺設計,平臺集成功能強大的硬件和用戶友好的軟件控制,能夠直觀地呈現(xiàn)各樣品參數(shù),并通過多種不同的分選模式對各樣品逐一分選,獲得目標樣品及量化的樣品參數(shù)數(shù)據(jù),方便、快捷且結果有據(jù)可循,特別適合于各種高通量微模式生物研究及大規(guī)模藥物篩選等領域。
可使用 FlowPilot 控制軟件進行如下操作:
(1)根據(jù)個人喜好輕松地進行儀器控制、數(shù)據(jù)采集和分配選項面板的訪問或隱藏;
(2)自定義和操作多個**的統(tǒng)計圖像(各參數(shù)直方圖、X-Y關系圖等),包括每個區(qū)域的自定義縮放和邏輯門控選項;(3)檢索實驗文件、樣本模板和數(shù)據(jù)分析文件(在線或離線),為采集后再分析提供了強大的工具支持;
(4)創(chuàng)建自定義的分選輸出模板,用于對于多孔板中每個孔的分配信息進行設定;
(5)以標準的流式細胞儀格式存儲數(shù)據(jù),以便以后使用實驗室中其他傳統(tǒng)的流式細胞儀軟件進行分析等。
Profiler/FlowPilot ProTM 軟件
Profiler/FlowPilot Pro 高級功能是在 FlowPilot 軟件基礎上,進一步對樣品個體光密度(EXT)和熒光參數(shù)(Red、Green、Yellow)的徑向分布進行掃描,獲得 Profiler 圖像,根據(jù) Profiler 圖形可對生物樣品進行進一步處理和分析。
Profiler 可以沿樣本軸向長度(TOF)進行多達8000個光學數(shù)據(jù)采樣,將數(shù)據(jù)采集從整體水平提升到**和多細胞的水平。隨后,軟件以圖形和數(shù)字的形式呈現(xiàn)這些信號沿物體長度方向上的變化,向實驗人員顯示每個樣品在多個“光學剖面”上所有光學參數(shù)的地形圖及強度變化,以峰高、峰寬、峰數(shù)和相對位置的形式進行表現(xiàn)——所有參數(shù)都可作為后續(xù)的分選條件。
Partial Profiling
Profiler 的另一個分析特性是“Partial Profiling”部分剖析,在樣本上選定一個區(qū)域,“Partial Profiling”會顯示出該區(qū)域詳細光學或熒光特性(峰高、峰寬及數(shù)量等),以生成用戶自定義分選參數(shù),“Partial Profiling”可以用于分析樣品部分區(qū)域的特有光學特性。
COPAS Infiniy 標配**性 FlowPilot-Pro 軟件平臺,集成功能強大的硬件和直觀的用戶控制,提高了光學靈敏度、流體力學參數(shù)調節(jié)和定量分選性能,為科研人員的實驗室提供了更高級別的分析分選功能和用戶體驗,特別是在高通量篩選上系統(tǒng)性能更加**、靈活性和易用性更加強大。
特點及優(yōu)勢
適用范圍廣
直徑 2-1500μm 樣品,從無機細顆粒物到斑馬魚均適用;
多種 COPAS Infinity 產(chǎn)品型號可供選擇,每種規(guī)格產(chǎn)品適用于某一特定粒徑范圍樣品使用;
多PMT和激光器可選,可用于各種熒光標記物研究;
分選模式多樣化,清晰辨別樣本差異;
數(shù)據(jù)客觀
量化生物顆粒徑向長度(TOF)、光密度(EXT)和熒光參數(shù),快速分析顆粒性質;
自定義參量范圍,系統(tǒng)根據(jù)設定值自動篩選;
具有熒光補償功能,測量參數(shù)更準確;
系統(tǒng)自動檢測、計算、比對生物微粒各項參數(shù),完成篩選過程,排除人為因素干擾;
標配 Profiler 軟件可對單微粒光密度、熒光參數(shù)的徑向分布做進一步細致分析。
全自動,準確高效
**分選速率可達20萬個/小時,節(jié)約大量人工成本;
系統(tǒng)按照程序,自動將生物微粒分配到96孔板或其他孔板中;
系統(tǒng)對每一個生物微粒逐個分析、分選,重現(xiàn)性更好;
適合大規(guī)模篩選,是目前世界上應用*成功的微模式生物分選系統(tǒng)。
生物活性保持
分選過程始終保持無菌環(huán)境,防止樣本污染;
氣流分選及低運行壓力保證生物樣本的生物活性和完整性;
高國際認可度
截止2019年,大粒徑流式分選平臺在全球已有超過2000個用戶,發(fā)表文獻數(shù)千篇,產(chǎn)品分布于多個國家**大學和研究所實驗室,應用涵蓋多個方面,國際認可度高。
獨特硬件設計
固定流動室設計,**性強。COPAS Infinity 為**性設計,每臺機器只能用于某個固定粒徑范圍樣品分析分選使用;
根據(jù)系統(tǒng)所配置的流動室光學**模塊(Fluidics and Optics Core Assemblies,F(xiàn)OCA)的不同,COPAS Infinity 系統(tǒng)有四種不同的型號。下表為不同規(guī)格 COPAS Infinity 系統(tǒng)所適用的樣品粒徑范圍以及常用的研究對象。
模塊化光學系統(tǒng)
COPAS Infinity 光學系統(tǒng)包括激光器、FOCA、軸向光檢測器、FS軸向散射光檢測器、PMT熒光散射傳感器以及濾光片等組成。COPAS Infinity 系統(tǒng)*多可以配置3個激光器,軸向光檢測器用于樣品軸向長度(TOF,飛行時間)的測量,樣本阻擋光線的總積分信號決定了樣品光密度(EXT,透光度)的大小。FS檢測器測量樣本軸向小角度散射光量,熒光散射可在四種不同的PMT探測器上同時測量,PMT探測器和濾光片元件也可根據(jù)用戶需求進行相應配置。
X-Y活動性分選平臺
X-Y分選平臺允許用戶將分析結束的樣品進行分選純化并允許分配到24/48/96/384孔板、離心管或其他容器中,COPAS Infinity 系統(tǒng)允許用戶創(chuàng)建自定義輸出模板,用戶可在軟件上編輯分選程序,包括每個分配位置包含的信息,如每個孔位輸出的樣本類型及個數(shù)等。
集成化功能(Integration)
COPAS Infinity也可作為多步工作站(Workflow)一個組成部分,允許響應來自外部控制器和軟件的指令信號觸發(fā)其進行工作。
COPAS Infinity的設計占地面積小,能夠更容易地安裝在商用生物安全柜內,從而提高安全性和無菌性。
多樣化進樣方式
樣品通常從50mL樣品管種自動加樣,攪拌器輔助防止樣品聚集,從而保證上樣均勻,較大粒徑的樣品可選配750mL和1500mL大型進樣杯和攪拌器。另外,針對異常脆弱或易于下沉/上浮的樣品(如脂肪細胞、植物原生質體等),可選擇5mL小型旋轉樣品杯OSIS (Oscillating Sample Introduction System) 來進行加樣。
LP SamplerTM
LP Sampler(Large Particle Sampler)是專門為溫和處理直徑10-1500μm的大顆粒、易碎樣品而設計的自動加樣系統(tǒng),它能夠從多孔板或培養(yǎng)皿中輕輕抽吸這些樣品,并將其完整、可行地輸送至COPAS Infinity系統(tǒng)。
配置選擇方案
(1) FOCA類型選擇
根據(jù)實驗需求選擇合適規(guī)格型號FOCA
(2) 多激光配置
*多三色激光器可選用于激發(fā)樣品熒光,標配488nm藍色激光器,可選375-660nm激光器
(3) 進樣方式選擇
根據(jù)COPAS Infinity規(guī)格不同可選擇50,750或1500mL規(guī)格樣品杯進樣,針對特殊樣品(如脂肪細胞等),可選擇5mL旋轉樣品杯進行加樣。也可選配Large Particle (LP) Sampler? 系統(tǒng)可以將10-1500 μm范圍內的樣品從多孔板、培養(yǎng)皿或者其他容器中進行全自動上樣
(4) 集成化功能(Integration)
完整的高通量分選平臺
COPAS Infinity 大粒徑顆粒物高通量分選平臺能可配合LP Sampler組成一套更加完整的高通量分選平臺;
能夠實現(xiàn)從多孔板進樣到多孔板分選的全自動化操作;
型號:COPAS Infinity & LP Sampler
應用領域
大粒徑流式分選平臺可用于直徑在2-1500μm的生物或非生物樣本分析分選,以下是來自全球2000位用戶發(fā)表文章統(tǒng)計的常見應用,相關文獻您可以移步到官方網(wǎng)站來參閱:https://www.unionbio.com/publications